支原體被稱為細(xì)胞培養(yǎng)中的“隱形對手"，它不會立刻讓培養(yǎng)液渾濁，也不會使細(xì)胞大片脫落，卻能在不知不覺中改變細(xì)胞的“性格"。下面用通俗的語言，總結(jié)一支原體污染后最常見的表現(xiàn)，方便大家快速識別。

1.       生長變慢
倍增時間延長30–50 %，傳代后兩三天仍達(dá)不到預(yù)期密度，好像細(xì)胞“罷工"一樣。

2.       形態(tài)“走樣"
貼壁細(xì)胞拉絲、邊緣毛糙，出現(xiàn)圓縮；懸浮細(xì)胞容易聚成小團(tuán)，單分散性下降。

3.       代謝異常
同樣接種量，培養(yǎng)液pH下降更快，顏色迅速變黃，但細(xì)胞數(shù)并未增加，提示“空轉(zhuǎn)"產(chǎn)酸。

4.       貼壁力下降
輕輕晃動培養(yǎng)皿，細(xì)胞成片脫落；胰酶消化時間明顯縮短，提示細(xì)胞附著力減弱。

5.       轉(zhuǎn)染效率驟降
外源質(zhì)?；虿《据d體產(chǎn)量突然降低，報告基因表達(dá)量下滑，重復(fù)實驗仍不穩(wěn)定。

6.       蛋白分泌“失真"
Western Blot或ELISA發(fā)現(xiàn)目標(biāo)蛋白條帶弱、背景高，甚至伴隨非特異條帶增多。

7.       細(xì)胞周期偏移
流式檢測顯示G0/G1比例升高，S期減少，仿佛細(xì)胞被“按了暫停鍵"。

8.       背景熒光增強(qiáng)
熒光顯微鏡下，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)細(xì)小亮點或絲狀信號，染色后更易觀察。

9.       凍存復(fù)蘇率降低
污染細(xì)胞凍存后再復(fù)蘇，活率明顯低于同期對照，恢復(fù)緩慢。

10.   交叉“感染"
同培養(yǎng)箱其他細(xì)胞系也出現(xiàn)類似狀態(tài)，提示污染源可能已擴(kuò)散。

如何進(jìn)一步確認(rèn)？

·         取培養(yǎng)上清做快速PCR檢測，30分鐘即可給出結(jié)果；

·         或使用熒光染色，高倍鏡下查看細(xì)胞周緣是否有微小亮點；

·         定期把“盲樣"送檢，保持監(jiān)測記錄，形成實驗室標(biāo)準(zhǔn)流程。

一句話：當(dāng)細(xì)胞“狀態(tài)莫名下滑"，別忘了把支原體列入排查清單。及時發(fā)現(xiàn)、立即處理，才能讓培養(yǎng)回到正軌。祝大家的細(xì)胞都健康、實驗順利！